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          臨武哪個(gè)藥店有神奇風(fēng)骨草膠囊:Shimada分類綜合腫瘤細(xì)胞的分化程度、類型及移行部位形成

          發(fā)布時(shí)間:2022-09-21 13:24:02

            在上兩期的連載內(nèi)容中,高博醫(yī)學(xué)(血液。┍本┭芯恐行谋本└卟┎┤梳t(yī)院童春容主任為大家介紹了MICM整合診斷中細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色和組織病理學(xué)的特點(diǎn),本期繼續(xù)MICM整合診斷技術(shù)中免疫學(xué)分析相關(guān)知識(shí)的解析。

            免疫學(xué)分析主要包括免疫組織化學(xué)染色(IHC)和流式細(xì)胞術(shù)(FCM),方法是采用不同染料或熒光染料標(biāo)記的單克隆抗體(單抗,mAb)對(duì)細(xì)胞懸液、細(xì)胞涂片或骨髓組織切片進(jìn)行染色,然后在流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡或光鏡下觀察細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的抗原標(biāo)記。

            免疫分析技術(shù)是確定血液腫瘤細(xì)胞系列,如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、髓系細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞、自然殺傷性T(NKT)細(xì)胞、淋巴樣漿細(xì)胞、漿細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞(DC)和非血液淋巴系統(tǒng)細(xì)胞等的關(guān)鍵技術(shù)。尤其是雙表型、雙克隆性、甚至多系列的血液腫瘤只能通過(guò)免疫學(xué)分析來(lái)診斷。

            該技術(shù)也是確定血液腫瘤細(xì)胞分化受阻階段(早期或前體或原始,晚期或成熟或外周)的關(guān)鍵技術(shù)。以急性白血病為例,如果形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合FCM,診斷與分型的準(zhǔn)確率及一致率可達(dá)90%以上,且重復(fù)性高。

            急性白血病病情發(fā)展速度很快,甚至可能在一天之內(nèi)迅速惡化,因此需要快速診斷并治療。根據(jù)形態(tài)、細(xì)胞化學(xué)染色和FCM對(duì)急性白血病的診斷和分類,最快幾個(gè)小時(shí)就可明確疾病診斷,醫(yī)生臨武哪個(gè)藥店有神奇風(fēng)骨草膠囊可先根據(jù)這兩份結(jié)果對(duì)患者進(jìn)行治療,避免延誤急性白血病的治療時(shí)機(jī)。

            IHC一般用染料或熒光染料標(biāo)記的抗體對(duì)組織病理切片的組織細(xì)胞染色,抗體與抗原結(jié)合后標(biāo)記的染料顯色,可在光鏡下觀察著色反應(yīng);或熒光素發(fā)出熒光,可在熒光顯微鏡下觀察熒光反應(yīng),從而了解細(xì)胞表達(dá)的免疫標(biāo)志。IHC是目前病理檢查最廣泛應(yīng)用的方法,一般與組織病理普通染色同時(shí)進(jìn)行。

            1、IHC的優(yōu)點(diǎn)

            病理組織標(biāo)本IHC具有組織病理的優(yōu)點(diǎn),在此基礎(chǔ)上進(jìn)行IHC,比FCM更容易確定某一免疫標(biāo)志陽(yáng)性或陰性細(xì)胞在組織部位的定位;對(duì)一些抽不出的細(xì)胞、少見(jiàn)細(xì)胞、體積很大的細(xì)胞等也可判斷;一些免疫標(biāo)志用IHC檢測(cè)比FCM更準(zhǔn)確,如細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)等。

            2、IHC的局限性

            IHC一般每次染色只能用一種抗體,但很少有一種免疫標(biāo)志是惡性細(xì)胞特有的標(biāo)志。

            在免疫標(biāo)記染色后,細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)不清楚,很難在不同染色切片對(duì)同一類細(xì)胞定位并確定這類細(xì)胞表達(dá)的全部標(biāo)志,尤其是對(duì)那些不破壞組織結(jié)構(gòu)的血液腫瘤細(xì)胞、或血液腫瘤細(xì)胞沒(méi)有定位于特定的組織結(jié)構(gòu)區(qū)域,與反應(yīng)性良性細(xì)胞混合分布的病理標(biāo)本。

            此外,在血液腫瘤細(xì)胞比例明顯比正常細(xì)胞少的情況下,僅根據(jù)IHC難以鑒定細(xì)胞的良惡性、惡性細(xì)胞的細(xì)胞系列及分化階段;目前有些抗體很難成功用于IHC染色和分析,如T細(xì)胞抗原受體(TCR)αβ或γδ鏈、免疫球蛋白輕鏈、TCRvβ區(qū),因此采用IHC很難診斷γδT淋巴瘤,也很難進(jìn)行成熟B細(xì)胞、T細(xì)胞的克隆性分析。

            同樣,IHC的診斷醫(yī)生需要具有組織病理醫(yī)生那樣豐富的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn),還要了解IHC染色試劑的優(yōu)缺點(diǎn)。

            FCM是將標(biāo)本制備成單個(gè)細(xì)胞懸液,然后將這些用熒光染料標(biāo)記的單抗標(biāo)記細(xì)胞通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)的方法。流式細(xì)胞儀可以探測(cè)單個(gè)細(xì)胞的大小、風(fēng)骨神奇草膠囊細(xì)胞內(nèi)顆粒的多少,及標(biāo)記在細(xì)胞上的熒光光譜,并將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào),用計(jì)算機(jī)存貯下來(lái),再用分析軟件進(jìn)行分析。

            1、FCM的優(yōu)點(diǎn)

            流式細(xì)胞儀除了直接探測(cè)細(xì)胞的大小、細(xì)胞內(nèi)顆粒的多少外,還可一次性檢測(cè)同一個(gè)細(xì)胞上3~10余種免疫標(biāo)志是否表達(dá)、表達(dá)強(qiáng)度、不同免疫標(biāo)志之間的關(guān)系。

            如果含有不同細(xì)胞群的標(biāo)本在同一試管染不同的熒光標(biāo)記的抗體,那么就可以劃出有同樣熒光標(biāo)記的一群細(xì)胞所在區(qū)域(設(shè)門),然后分析和計(jì)算該細(xì)胞群的特征和數(shù)量。

            FCM可以在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)完成對(duì)同一患者幾十萬(wàn)個(gè)細(xì)胞上數(shù)百種標(biāo)記的分析,比IHC更為快速、簡(jiǎn)便,一致性及重復(fù)性更好。

            FCM可檢測(cè)多種標(biāo)本,如血液、骨髓、活檢組織、各種細(xì)針或粗針穿刺標(biāo)本、胸水、腹水、腦脊液等多種體液,因此容易檢測(cè)血液腫瘤在其它部位的浸潤(rùn)。

            雖然血液腫瘤細(xì)胞上的單個(gè)免疫標(biāo)志與正常細(xì)胞差異很小,但是綜合多種免疫標(biāo)志的分析,大多數(shù)的惡性血液細(xì)胞具有一些異常表達(dá)的現(xiàn)象,可幫助判斷細(xì)胞的良惡性。而與形態(tài)、組織病理、IHC相比,F(xiàn)CM更容易判斷細(xì)胞的良惡性。

            例如,惡性成熟B細(xì)胞和惡性漿細(xì)胞膜或胞漿限制性表達(dá)單一的免疫球蛋白(Ig)輕鏈(κ或λ),而正常成熟 B細(xì)胞膜或漿細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)κ或λ的細(xì)胞比例一般為3:2;正常成熟 T細(xì)胞上 T細(xì)胞抗原受體抗原(TCR)為多克隆表達(dá),而惡性T細(xì)胞 TCR抗原為某一克隆明顯增加,其它克隆明顯減少;血液腫瘤細(xì)胞還可有脫氧核糖核酸(DNA)倍體異常、抗原表達(dá)過(guò)強(qiáng)、應(yīng)該表達(dá)的抗原丟失、不同系列細(xì)胞的抗原同時(shí)表達(dá)、早期晚期抗原同時(shí)表達(dá)、罕見(jiàn)細(xì)胞(如TCRγδ+T細(xì)胞等)明顯升高等。

            比如,當(dāng)原始細(xì)胞只有20%,而正常粒細(xì)胞≥50%時(shí),此時(shí)根據(jù)粒細(xì)胞標(biāo)志細(xì)胞占全部有核細(xì)胞(ANC)的比例就診斷急性粒細(xì)胞白血病是完全錯(cuò)誤的。

            因此,很多免疫表型復(fù)雜的血液腫瘤用FCM來(lái)診斷比較容易,用IHC診斷卻很困難,比如同一患者存在多種惡性血液腫瘤克隆,如T、B、漿細(xì)胞、髓系共存,淋巴瘤和急性白血病共存,甚至有血液腫瘤和其它系統(tǒng)腫瘤共存的現(xiàn)象,如漿細(xì)胞腫瘤和肺癌共存等。

            FCM還可以對(duì)一些轉(zhuǎn)移癌等非造血系統(tǒng)腫瘤做出提示性診斷,我們中心就使用FCM在組織、腦脊液、骨髓、血液等標(biāo)本中查出過(guò)肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等。

            由于FCM檢查的細(xì)胞數(shù)很多,分析的標(biāo)記多,F(xiàn)CM可以檢查很微量的血液腫瘤細(xì)胞,敏感性可達(dá)10-3~10-4;且覆蓋面廣,對(duì)>80%的血液腫瘤細(xì)胞都可用FCM檢測(cè),因此是監(jiān)測(cè)治療后微小殘留腫瘤(MRD)的最常用方法,而且可以很快報(bào)告,及時(shí)調(diào)整治療方案。

            血液腫瘤細(xì)胞上的一些分化抗原決定簇(CD),如CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD52、CD70、CD138、CD371、BCMA等,針對(duì)這些抗原,已經(jīng)有相應(yīng)的抗體,嵌合性受體基因轉(zhuǎn)染的T細(xì)胞(CAR-T)等有效治療方法,因此檢測(cè)這些標(biāo)記可幫助選擇靶向性的抗體或CAR-T治療。

            靶向治療后,腫瘤細(xì)胞上的這些抗原還有可能丟失,因此監(jiān)測(cè)這些抗原的變化可指導(dǎo)更精確的靶向治療。

            有神奇風(fēng)骨草是哪產(chǎn)的些免疫標(biāo)志代表血液腫瘤的預(yù)后不好,如 CD34+CD56+的急性髓系白血。ˋML)、混合細(xì)胞性急性白血。∕PAL)等,因此免疫分型也有一定的預(yù)測(cè)預(yù)后的意義。

            2、FCM的局限性

            與形態(tài)、組織病理及IHC相比,F(xiàn)CM需要檢測(cè)液態(tài)細(xì)胞,不能觀察到病理結(jié)構(gòu),不能將細(xì)胞定位于組織部位。一些太大的細(xì)胞,如巨核細(xì)胞、霍奇金淋巴瘤細(xì)胞、多核巨細(xì)胞等可能檢測(cè)不出。一些無(wú)免疫標(biāo)記異常的細(xì)胞也難以確定其良惡性,如一些紅白血病的幼紅細(xì)胞。

            此外,F(xiàn)CM需要將標(biāo)本處理成單個(gè)細(xì)胞懸液,并染色,甚至洗滌,一些血液腫瘤細(xì)胞在標(biāo)本運(yùn)送、處理過(guò)程中死亡(如幼紅細(xì)胞、大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞容易破壞),可能檢測(cè)不到,或檢測(cè)的比例與形態(tài)或病理明顯不符;腦脊液、其它體液或組織的細(xì)胞,如果沒(méi)有血清等保護(hù),或時(shí)間較長(zhǎng)也容易破壞。

            在比例方面,如果骨髓中正常幼紅細(xì)胞大量破壞,會(huì)導(dǎo)致有核細(xì)胞比例失常,腫瘤細(xì)胞比例高于形態(tài)或病理結(jié)果;如果腫瘤細(xì)胞破壞或標(biāo)本稀釋則會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞低于形態(tài)或病理。另外,抽骨髓時(shí)一般第一針首先抽少量骨髓血涂片進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析,此后抽取骨髓血做染色體甚至基因,如果最后才抽取做流式分析,會(huì)導(dǎo)致大量血液稀釋骨髓。

            一些惡性細(xì)胞與組織黏附性高,難以穿刺吸出或在組織標(biāo)本時(shí)不能成為單個(gè)細(xì)胞懸液,F(xiàn)CM也會(huì)漏診。

            還有值得注意的是,F(xiàn)CM診斷所用的有些標(biāo)志如CCND1不如病理敏感,因此診斷套細(xì)胞淋巴瘤要結(jié)合IHC。很多類型的血液腫瘤有共同的免疫標(biāo)志,如各類前體 B、T、髓系細(xì)胞腫瘤僅依據(jù)FCM尚不能對(duì)亞型作出準(zhǔn)確診斷和分型。

            FCM對(duì)診斷技術(shù)人員的要求也很高,需要在以下多方面有豐富的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn):血液病臨床特征、正常細(xì)胞分化發(fā)育過(guò)程中免疫標(biāo)志的變化規(guī)律、疾病的免疫標(biāo)志特點(diǎn)、不同廠家不同克隆號(hào)抗體及其標(biāo)記的熒光光的特點(diǎn),不同熒光標(biāo)記抗體組合后的變化,怎樣識(shí)別需要深入分析的目標(biāo)細(xì)胞(設(shè)門),儀器及應(yīng)用軟件的標(biāo)準(zhǔn)化、調(diào)試等等。

            目前FCM分析細(xì)胞參數(shù)時(shí)是一次性平面分析兩個(gè)參數(shù),然后將多次的平面分析組合起來(lái)形成結(jié)論,這也需要FCM診斷醫(yī)生有豐富的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)。

            FCM需要分析活的細(xì)胞,需要的細(xì)胞數(shù)量多,對(duì)活性不好的細(xì)胞容易出現(xiàn)非特異染色,細(xì)胞數(shù)量很少的標(biāo)本容易導(dǎo)致分析不全面,容易出現(xiàn)誤診或漏診。

            3、FCM相關(guān)專家共識(shí)、標(biāo)準(zhǔn)、指南的解讀

            FCM診斷的正確性與標(biāo)本處理方式、儀器校準(zhǔn)、檢測(cè)抗體的選擇、抗體組合、目標(biāo)細(xì)胞的設(shè)門、抗原表達(dá)比例及強(qiáng)度的判斷,診斷醫(yī)師分析的仔細(xì)程度、知識(shí)水平及經(jīng)驗(yàn)等因素都有關(guān),目前國(guó)內(nèi)外不同單位的檢測(cè)結(jié)果尚不易被互認(rèn),尤其對(duì)血液腫瘤細(xì)胞比例很小的MRD的監(jiān)測(cè),差異及分歧很大。國(guó)際上一些協(xié)作組監(jiān)測(cè)MRD時(shí),一般僅選擇幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室來(lái)報(bào)告。

            為了減少不同實(shí)驗(yàn)室之間的報(bào)告誤差,國(guó)際上先后出臺(tái)了一些FCM診斷血液腫瘤的專家共識(shí)。國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)、國(guó)際臨床流式學(xué)會(huì)(ICCS) 、歐洲白血病網(wǎng)絡(luò)(ELN)、英國(guó)血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(BCSH)等都制定了一系列的FCM診斷血液病的實(shí)踐指南。

            隨著FCM知識(shí)的普及,國(guó)內(nèi)FCM實(shí)驗(yàn)室在診斷血液腫瘤方面有很大進(jìn)步,但是對(duì)淋巴瘤的診斷及分型,很多腫瘤醫(yī)院或腫瘤科尚未把FCM列為常規(guī)診斷,因此尚需要努力普及宣傳這方面的知識(shí)。

            專家介紹

            童春容

            高博醫(yī)學(xué)(血液。┍本┭芯恐行谋本└卟┎┤梳t(yī)院

            高博醫(yī)學(xué)(血液病)研究中心免疫與靶向治療學(xué)科帶頭人,高博醫(yī)學(xué)(血液。┍本┭芯恐行谋本└卟┎┤梳t(yī)院科研院長(zhǎng)。

            血液一科(普通血液。┲魅,從事血液內(nèi)科臨床工作及實(shí)驗(yàn)研究30多年。

            擅長(zhǎng)各類惡性血液腫瘤的整合診斷(整合臨床病史及多種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù))及綜合診療(化療、免疫治療、靶向治療、中藥等),注重個(gè)性化精準(zhǔn)診療,尤其擅長(zhǎng)血液腫瘤的免疫治療。

            為國(guó)內(nèi)較早一批開(kāi)展免疫治療的專家之一,在CAR-T細(xì)胞治療難治復(fù)發(fā)血液腫瘤領(lǐng)域?yàn)閲?guó)際領(lǐng)先水平,獲得國(guó)際學(xué)術(shù)界的認(rèn)可。領(lǐng)導(dǎo)團(tuán)隊(duì)與企業(yè)合作聯(lián)合在國(guó)內(nèi)率先采用新型第二代CD19-41BB-CART CAR-T細(xì)胞治療難治復(fù)發(fā)的急性B淋巴細(xì)胞白血;此后聯(lián)合開(kāi)發(fā)了多種靶點(diǎn)的CART臨床用于治療血液腫瘤,包括CD1a、CD4、CD7、CD20、CD22、CD30、CD33、CD70、CD79b、CD123、CD138、CD371等。是國(guó)內(nèi)外開(kāi)展CART臨床研究病例數(shù)及種類最多的中心治療之一。多開(kāi)發(fā)項(xiàng)研究成果在ASH、EHA、JSH上展示,多篇論文被《Leukemia》、《Blood Cancer Jour》等著名雜志收錄。還注重發(fā)展多種免疫治療技術(shù),如新抗原免疫治療等治療血液腫瘤及實(shí)體瘤等。

            作者 | 童春容



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